檸檬酸是一種弱酸，它提取的磷被認為對作物有效。在一定酸度下，溶液中的磷與偏釩酸鹽和鉬酸鹽作用，形成黃色三元雜多酸。在一定范圍內(nèi)其黃色深淺與磷的濃度正相關(guān)。

    4 試劑    所用試劑除注明者外，均為分析純。實驗用水應(yīng)符合GB/T 6682 第五章中三級水的規(guī)格。    4.1 硫酸(GB 625)。    4.2 檸檬酸：2％(m/V)溶液    稱取20g檸檬酸(HG 3—1108)溶于水并稀釋至1L。此液使用前配制。    4.3 硫酸：5％(V/V)溶液    吸取5mL硫酸(4.1)緩緩加入到90mL水中，冷卻后加水至100mL。    4.4 氫氧化鈉：10％(m/V)溶液    稱取10g氫氧化鈉(GB 629)溶于100mL水中。    4.5 釩鉬酸銨試劑    A液：稱取25g鉬酸銨(GB 657)溶于400mL水中；    B液：稱取1.25g偏釩酸銨(HG 3—941)溶于300mL沸水中，冷卻后加250mL硝酸(GB 626)，冷卻。    在攪拌下將A液緩緩傾入B液中，用水稀釋至1L，混勻，貯于棕色瓶中。    4.6 二硝基酚指示劑：0.2％(m/V)溶液    稱取0.2g2，4或2，6-二硝基酚溶于100mL水中。    4.7 磷標準貯備溶液：0.1mg/mL    稱取0.4390g經(jīng)105℃烘干2h的磷酸二氫鉀(GB 1274)，用水溶解后，轉(zhuǎn)入1L容量瓶中，加入5mL硫酸(4.1)，冷卻后加水定容。此溶液1mL含磷(P)0.1mg。    4.8 磷標準溶液：50μg/mL    吸取50.0mL磷標準貯備溶液(4.7)放入100mL容量瓶中，加水定容。此溶液1mL含磷(P)50μg。

    5 儀器、設(shè)備    通常用實驗室儀器和    5.1 天平：感量0.01g。    5.2 振蕩機(往返式，160～170r/min)或其他相同效果的振蕩機。    5.3 分光光度計。

    6 試樣的制備    取風干的實驗室樣品充分混勻后，按四分法縮減至約100g，粉碎，全部通過1mm孔徑篩，裝入樣品瓶中，備用。

    7 分析步驟    7.1 試樣溶液制備    稱取試樣5.00g置于200mL塑料瓶或250mL三角瓶內(nèi)，加入100.0mL25±1℃的檸檬酸溶液(4.2)，加塞，在25±1℃下振蕩30min，用無磷濾紙干過濾入干燥的三角瓶中，棄去最初少量濾液。 同一試樣做兩個平行測定。    7.2 空白溶液制備    除不加試樣外，應(yīng)用的試劑和操作步驟同7.1。    7.3 校準曲線繪制    吸取磷標準溶液(4.8)0，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00mL于7個50mL容量瓶中，加入與吸取試驗溶液等體積的空白溶液，加水至30mL左右，加入2滴2，4或2，6-二硝基酚指示劑溶液（4.6），用氫氧化鈉溶液（4.4）和硫酸溶液（4.3）調(diào)節(jié)溶液至剛呈微黃色，加入10.0mL釩鉬酸銨試劑（4.5），搖勻，加水定容。此溶液為1mL含磷（P）0，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00μg的標準溶液系列。在室溫15℃以上條件下，放置20min后(最長不超過4h)，在分光光度計上波長440nm處用2cm光徑比色皿，以空白溶液調(diào)節(jié)儀器零點，進行比色，讀取吸光度。根據(jù)磷濃度和吸光度繪制校準曲線或求出直線回歸方程。